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如何測定飼料菌體蛋白中的真蛋白?

發布時間:2020-12-11人氣:6
 實驗室常用考馬斯亮藍G-250法,不是以測定"氮"含量為基礎。馬斯亮藍是一種甲基取代的三苯基甲烷,分子中磺酸基的藍色染料,在465nm處有大吸收值。考馬斯亮藍G-250能與蛋白質通過范得華相互作用形成蛋白質-考馬斯亮藍復合物藍色溶液,引起該染料的大吸收λmax的位置發生紅移,在595nm處有大吸收值。由于蛋白質-考馬斯亮藍復合物在595nm處的光吸收遠高于考馬斯亮藍在465nm處的光吸收,因此,可大大地提高蛋白質的測定靈敏度。蛋白質-考馬斯亮藍復合物溶液顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。利用溶液顏色的差異進行比色測定,適合于蛋白質類的定量分析,呈色反應顏色穩定、靈敏度高,低測試蛋白質量在1ug左右。但是考馬斯亮藍G250分子含苯環。
也可以用“紫外吸收法”,它也不是以測定“氮”含量為基礎,其中以280nm處的吸光度值是常用的紫外吸收法。其原理是蛋白質分子中酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,使蛋白質具有吸收紫外光的性質。吸收高峰在280nm處,其吸光度(即光密度值)與蛋白質含量成正比。此外,蛋白質溶液在238nm的光吸收值與肽鍵含量成正比,利用一定波長下,蛋白質溶液的光吸收值與蛋白質濃度的正比關系,可以進行蛋白質含量的測定,三聚氰胺等化合物含有共軛雙鍵的苯環,但是沒有肽鍵,所以238nm處的吸光度值可以排除其它苯環共軛雙鍵的干擾。

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